（一）原理及（jí）適用（yòng）範圍

將乳糖膽鹽選擇性培養基和TTC顯色劑加載在（zài）紙片上，經培養後能夠在紙片上生長並發（fā）酵乳糖產（chǎn）酸的即為大腸菌群陽性，記錄每（měi）個稀釋度（dù）大腸菌群陽性紙片數，根據大腸菌群MPN表查出相（xiàng）應（yīng）的大腸菌群（qún）數。食品大腸菌群檢驗紙片法與國標法中的九管（guǎn）法相對應，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以（yǐ）內，省去了製備培養基、消和培養器（qì）皿的清洗處理（lǐ）等大量輔（fǔ）助性（xìng）工作，隨時可以打開（kāi）包裝進行抽樣檢測。執行標準：食品安全國家標準食品微生物檢（jiǎn）驗大腸菌群計數MPN計數法（GB 4789.3）。

適用於各類食品、飲料等樣品（pǐn）中大腸菌群的快速測定。

（二）操作方（fāng）法

樣品處理：

按無菌操作稱取樣（yàng）品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷酸緩衝（chōng）液稀釋液（或生理鹽水（shuǐ））的取（qǔ）樣瓶或均質杯中，經充分振搖做成1：10的樣品勻（yún）液。樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時（shí）用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調節。用（yòng）1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入（rù）含有9mL稀（xī）釋液的試管內（nèi），振搖試管製成1：100的樣品勻液。根據（jù）對樣品（pǐn）汙染狀況的估計（jì），按上述操作，一次製成10倍遞（dì）增係列稀釋樣品勻液。每（měi）遞增（zēng）稀釋1次，換一支1mL無（wú）菌吸管或吸頭。從製備樣品勻液至樣品接（jiē）種完畢，全過程不得超過15min。

接種：

選取兩個稀釋（shì）度進行接種，普通食品一般（bān）采用1：10和1：100這兩個稀釋度，飲料采用原液和1：10兩個稀釋度。本品每份由三片大紙片（接（jiē）10mL，袋中二片疊放算作一大片），六片小紙片（接1mL）組成。

用滅菌吸管吸取10mL 1：10樣品勻液加到（dào）含有大紙片的塑料袋中（相當於接樣品1g），吸（xī）透後平放，做（zuò）三個重複。再（zài）用1mL滅菌（jun1）吸（xī）管吸取1mL同一稀釋度的（de）樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當於接樣品（pǐn）0.1g），做三個重複。再（zài）另取一支（zhī）1mL滅菌吸管吸（xī）取1mL 1：100樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當於接樣品0.01g），做三個重複。

培養：

將接種好的紙片（可疊放（fàng））放（fàng）入36℃±1℃培養箱中培養15～24h。

（三）大腸（cháng）菌群非常可能（néng）數（MPN）的報告。

若紙片變黃或在（zài）黃色（sè）背景上呈現紅色斑點（diǎn）為大腸菌群陽性紙（zhǐ）片。紙片保持（chí）紫藍色不變或在紫藍色背（bèi）景上（shàng）呈現紅色斑點，但周圍（wéi）沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。

記錄每個稀釋度大腸菌（jun1）群陽性紙片數，根據《食品飲料大腸菌群（qún）MPN表》查出相應的大腸菌群數。

如接種的第一個梯度為原（yuán）液，應將表上查出的結果除以10。

（四）注意事項

新的國家標準所用的單位（wèi）改為每克（或毫升）檢樣中大腸菌群非常可能數，標準的接種量為0.333g（mL），MPN表也是由此而設計。而使用本品的標（biāo）準接（jiē）種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻（yún）液相當於1g樣品，因而表內數字應相（xiàng）應降低10倍。飲料樣品的接種量為33.3mL，大紙片接種10mL樣品（pǐn）原液，表（biǎo）內數字應降低（dī）100倍。

（五）保存條（tiáo）件

本產品需存放在4℃～10℃冰箱（xiāng）中，保質期為一年，鋁箔袋打開（kāi）後,未用完的紙片要放回鋁箔袋中（zhōng）封好，放到冰箱中，一個月內用完。在高濕度的環境中可能出現冷凝水，非常好在拆封前將整包回溫至（zhì）室溫。