1 適用範圍：

可用於各類食品及（jí）原料中菌落總數的測定。也（yě）可用於與食品接觸的容器、操作台和其他設備（bèi）表麵的（de）衛生檢測。

2 方法原理：

將營養培（péi）養基、凝膠和氯化（huà）三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經加樣、培養後，細菌菌落在測試片（piàn）上顯現出紅色菌斑，通過計數報告結果。

3 操作方法

（1）樣品處理：無菌稱（chēng）取樣品25g（或25mL）放（fàng）入含有225mL無菌生理鹽水的采樣（yàng）瓶或均質杯內，經充（chōng）分振搖（均質）做成1:10的稀（xī）釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，用1mL滅菌吸管反複吸吹製成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀（xī）釋度的（de）稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

（2）接種：一般食（shí）品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（pǐn）（如食用純水和礦泉水等）可（kě）直接用原液檢測。將測試片放在水平台麵上，揭開上麵的透明薄膜（mó），用（yòng）滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的紙（zhǐ）片（piàn）上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養基凝固，非常（cháng）後用手輕（qīng）輕地壓一下。每個稀釋（shì）度接種兩片。

（3）培養：將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明麵朝上水平置於（yú）恒溫培養箱內，堆疊片數（shù）不超過（guò）12片。培養溫（wēn）度為（wéi）36℃±1℃，培養15～24h。

4 結果（guǒ）判斷與計數：

（1）細菌在紙（zhǐ）片上生長後會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（10個～100個）的紙片（piàn）進行計數，乘（chéng）以稀釋倍數後即為每克（或毫升）樣品中所（suǒ）含的細（xì）菌菌落總數。菌落數在100以（yǐ）內時，按實有數報（bào）告。大於100時，用二（èr）位（wèi）有效數字，二位有效（xiào）數字後麵的數（shù）字，以四舍五入方法計算，並以10的指數來表示。

（2）計（jì）數原則與報告方式

   ①通常選擇菌落（luò）在（zài）10個（gè）～100個之間的紙片進行計數，乘以稀釋倍數報告之（見下表中例次1）。國（guó）家標準菌（jun1）落總數報告方式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。

   ②若有兩個稀釋度的菌落數（shù）在10個～100個之內，兩者的比值小於2，則取其（qí）平均（jun1）數，若大於2，則采用稀釋度小者（zhě）報告（見下表中（zhōng）例次2和例次3）。

③若三個稀釋度的菌落數（shù）都有在（zài）10個～100個之內時，應選擇（zé）二個低數值的平均數（見下表中例次4）

④若（ruò）三個稀釋度的菌落數均小於10個或大於100個時，應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數（shù）；或采用均小於數量標準的非常小值，或采用均大於數量標準的（de）非常大值（見下表中例次5和例次6）。

5 表麵取樣方法：

加1mL滅菌生理鹽水在測試片上（shàng），靜置至少1h使培養基凝固；提起（qǐ）上層膜，使中央濾紙部分貼（tiē）到待測（cè）物表麵，用手在外側輕壓；然後將上蓋膜合上，置培養箱內培養。

6 注意事項：

使用過的紙片上帶有活菌，需（xū）及時按（àn）照生物安（ān）全廢棄物（wù）處理原則進行處理。

菌落數少時的情況菌落數多時（shí）的情況